Напишем:


✔ Реферат от 200 руб., от 4 часов
✔ Контрольную от 200 руб., от 4 часов
✔ Курсовую от 500 руб., от 1 дня
✔ Решим задачу от 20 руб., от 4 часов
✔ Дипломную работу от 3000 руб., от 3-х дней
✔ Другие виды работ по договоренности.

Узнать стоимость!

Не интересно!

Введение векторных ДНК в E. Coli

Главный этап в молекулярном клонировании — введение рекомбинантной ДНК в бактериальные клетки.

В основе большинства методов бактериальной трансформации лежит наблюдение, согласно которому обработка бактерий хлористым кальцием увеличивает эффективность поглощения ими ДНК бактериофага l. Подобным же образом дело обстоит и с плазмидной ДНК. С тех пор предложены различные варианты основного метода, разработанные с целью увеличения эффективности трансформации у разных штаммов бактерий. Выход трансформантов в большинстве случаев составляет 105—107- на- 1 мкг интактной ДНК. Компетентна (т. е. способна поглощать плазмидную ДНК) только очень небольшая фракция клеток, в трансформации успешно участвует лишь 1 из приблизительно 10000 молекул  ДНК.

После проникновения в бактерию происходит репликация плазмидной ДНК и начинается экспрессия маркеров устойчивости к лекарственным препаратам, в результате чего трансформанты приобретают устойчивость к антибиотику.

Бактерия способна поглощать ДНК в течении короткого периода времени, но в результате выдерживания с агентами, повышающими эффективность трансформации, большинство бактериальных штаммов приобретает способность сохранять состояние компетентности на протяжении I—2 дней. Компетентные клетки штамма можно приготовить в больших количествах, проверить и хранить замороженными.


Orgy