Напишем:


✔ Реферат от 200 руб., от 4 часов
✔ Контрольную от 200 руб., от 4 часов
✔ Курсовую от 500 руб., от 1 дня
✔ Решим задачу от 20 руб., от 4 часов
✔ Дипломную работу от 3000 руб., от 3-х дней
✔ Другие виды работ по договоренности.

Узнать стоимость!

Не интересно!

Клонирование фрагментов ДНК в определенной ориентации

Большинство векторных плазмид содержит по одному уникальному сайту узнавания для двух или более рестриктирующих ферментов. Например, плазмида pBR322 содержит по одному сайту для рестриктаз Hindlll и BamHl. С помощью электрофореза в агарозном геле можно выделить большой фрагмент плазмидной ДНК, получающийся при расщеплении ее этими двумя рестриктирующими ферментами, и лигировать его с сегментом чужеродной ДНК, липкие концы которого совместимы с концами фрагмента, образующегося при расщеплении ферментами BamHl и Hindlll. Получающийся в результате этого кольцевой рекомбинант используют затем для трансформации Е.coli в устойчивый к ампициллину штамм. Так как одноцепочечные концы разрывов, вызванных Hindlll и BamHl, некомплементарны друг другу, не может происходить эффективного замыкания в кольцо большого фрагмента вектора, и он трансформирует клетки Е.coli очень слабо. Поэтому большинство устойчивых к ампициллину колоний содержит плазмиды с встроенными между сайтами Hindlll и BamHl сегментами чужеродной ДНК. В зависимости от сегмента чужеродной ДНК и от локализации сайтов рестрикции в векторе можно, конечно, использовать различные комбинации ферментов.

Клонирование фрагментов ДНК в определенной ориентации


Orgy