Напишем:


✔ Реферат от 200 руб., от 4 часов
✔ Контрольную от 200 руб., от 4 часов
✔ Курсовую от 500 руб., от 1 дня
✔ Решим задачу от 20 руб., от 4 часов
✔ Дипломную работу от 3000 руб., от 3-х дней
✔ Другие виды работ по договоренности.

Узнать стоимость!

Не интересно!

Лизис бактерий, электрофорез в агарозном геле, радиоавтограф геля

Лизис бактерий — растворение, разрушение бактериальных клеток под влиянием различных агентов, например ферментов, бактериолизинов, бактериофагов, антиб-в. Три различные методики лизиса. Лизис кипячением и лизис щелочью, отличаются высокой эффективностью и в случае малых плазмид (<10 кЬ) дают выход 2—3 мг/л. Третий метод сравнительно более мягкий, и им следует пользоваться в случае больших плазмид (>10 кЬ).

Электрофорез в агарозном геле — стандартный метод, используемый для разделения, идентификации и очистки фрагментов ДНК. С помощью этой простой техники можно быстро разделить такие смеси фрагментов ДНК, которые не могут быть разделены другими способами, например центрифугированием в градиенте плотности. Полосы ДНК в геле можно окрашивать флуоресцирующим и интеркалирующим в ДНК красителем — бромистым этидием в низкой концентрации. Просматривая прокрашенный гель в ультрафиолетовом свете, можно заметить даже 1 нг ДНК.

Скорость миграции ДНК через агарозный гель при электрофорезе определяется пятью главными параметрами:

1.                  Размер молекул ДНК Молекулы линейной двухцепочечной ДНК перемещаются в геле предположительно одним концом вперед со скоростями, обратно пропорциональными десятичном логарифму их молекулярных масс.

2.                  Концентрация агарозы. Фрагменты ДНК данного размера перемещаются в геле, содержащем разные концентрации агарозы, с разными скоростями.

3.                  Конформация ДНК. ДНК имеющие одинаковую молекулярную массу, но разные конформации, например кольцевая, кольцевая с одноцепочечным

4.                  Напряженность электрического поля. При низких напряженностях скорость перемещения фрагментов линейной ДНК пропорциональна приложенному напряжению. Однако с увеличением напряженности электрического поля подвижность фрагментов ДНК с высокой молекулярной массой дифференциально возрастает.

5.                  Состав оснований и температура. В агарозных гелях в области температур от 4 до 30 °С изменения относительной электрофо-ретической подвижности фрагментов ДНК разного размера не наблюдается.

Радиоактивные нуклеиновые кислоты можно обнаружить радиоавтографией. Методы радиоавтографии имеют большую чувствительность, дают более высокое разрешение и при их применении не разрушается проба. Как правило, при радиоавтографин используют изотоп 32Р

1.Прикрепите радиоавтографируемый материал пластырем или клейкой лентой к подложке из картона или бумаги ватман ЗММ.

2.                  Приклейте кусочки пластыря, помеченные радиоактивными чернилами, в нескольких местах по краям пробы.Радиоактивные чернила готовят в виде смеси небольшого количества 32Р и водостойких черных чернил.

3.Когда чернила высохнут, заверните пробу и подложку в пленку. Это предотвратит загрязнение усиливающего экрана и кассеты, а также прилипание пробы к рентгеновской пленке.

4.                  Поместите пробу в темной комнате в кассету и накройте ее листом рентгеновской пленки. Экспонируйте пленку от нескольких часов до нескольких дней.

5.                  Пленку сушат в теплой камере или при комнатной темпе-
ратуре


Orgy