Этапы генно-инженерного конструирования рекомбинантных ДНК
- Подробности
- Категория: Ответы на вопросы по курсу Генная инженерия
основная схема любой генно-инженерной работы включает:
1) обработку кольцевой векторной молекулы рестриктазой с образованием линейной формы ДНК;
2) сплавление ее с фрагментом чужеродной ДНК, ведущее к формированию гибридной структуры;
3) введение гибрида в клетку реципиента;
4) отбор клонов трансформированных клеток на селективных средах;
5) доказательство присутствия рекомбинантной ДНК в этих клонах путем ее выделения из клеток, обработки соответствующими рестриктазами и анализа образовавшихся фрагментов методом электрофореза в агарозном геле.
Метод позволяющий включить клонируемую донорную ДНК в состав вектора основан на соединении фрагментов, каждый из которых несет идентичные «липкие» концы, полученные под действием одной и той же рестриктазы. При другом методе, ферментативном, используется возможность соединения двухцепочечных концов фрагментов ДНК с помощью ДНК-лигазы.
В тех случаях, когда векторами служат плазмиды, рекомбинантные ДНК вводят в реципиентные бактерии путем трансформации.