Проблемы экспрессии эукариотических генов в бактериях.
- Подробности
- Категория: Ответы на вопросы по курсу Генная инженерия
Несмотря на очевидные успехи работ по созданию микроорганизмов, синтезирующих ряд важных продуктов эукариотического происхождения, проблема экспрессии чужеродных генов у прокариот имеет ряд ограничений. Это связано с тем, что:
1. при сверхпродукции полезных для человека и не нужных клетке соединений, кодируемых гибридной плазмидой, усиливается неустойчивость самих гибридов и вероятность элиминации из них встроенных генов. Стабильность гибридных ДНК снижается и с увеличением размеров вставки в вектор. Использование регулируемых промоторов предохраняет клетку от чрезмерной для нее метаболической активности, связанной с избыточной продукцией чужеродного белка.
2. эукариотические промоторы могут не распознаваться бактериальной РНК-полимеразой.
3. РНК, транскрибирующаяся с эукариотических генов, не содержит последовательности, необходимой для ее связывания с рибосомами.
4. иРНК может содержать нитроны, которые следует вырезать.
5. эукариотические белки часто становятся субстратами для бактериальных протеаз, опознающих такие белки как чужеродные.
Первые два ограничения преодолеваются за счет создания векторов, несущих собственные промоторы и нужные последовательности, третье можно обойти путем использования кДНК химически синтезированных генов. Протеазная активность реципиентных бактерий подавляется мутациями.