Напишем:


✔ Реферат от 200 руб., от 4 часов
✔ Контрольную от 200 руб., от 4 часов
✔ Курсовую от 500 руб., от 1 дня
✔ Решим задачу от 20 руб., от 4 часов
✔ Дипломную работу от 3000 руб., от 3-х дней
✔ Другие виды работ по договоренности.

Узнать стоимость!

Не интересно!

Ник-трансляция ДНК

ДНК-полимеразаI Е. coli присоединяет нуклеотидные остатки к З'-гидроксильному концу, который образуется при разрыве одной из цепей двухцепочечной молекуды ДНК. Кроме того, благодаря своей 5'—З'-экзонуклеазной активности фермент может удалять нуклеотиды с 5'-конца, образующегося при разрыве. Удаление нуклеотидов с 5'-конца разрыва и последовательное добавление нуклеотидов к З'-концу приводят к перемещению разрыва вдоль цепи ДНК (ник-трансляции). Заменяя нуклеотиды, формирующие цепь ДНК, на радиоактивные, можно получить меченную 32Р ДНК.

1. Pеакционная смесь содержит 1 мкг ДНК в объеме 50 мкл.

2.        Pеакции ник-трансляции проводят при минимальных концентрациях (2 мкМ) меченых dNTP и существенно более высоких концентрациях (20 мкМ) немеченых dNTP.

3.       Добавляют в реакционную смесь 0,5 мкл разбавленной ДНКазы I (0,1 мкг/мл) и перемешивают с помощью встряхивания.

4.       Добавляют 5 ед.  ДНК-полимера-зы I Е.coli и перемешивают.

5.       Инкубируют при 16 °С в течение 60 мин.

6.        Реакцию останавливают добавлением 2 мкл 0,5 М ЭДТА..

7.            Отделяют ник-транслированную ДНК от невключившихся dNTP на микроколонке с сефадексом G-50 обычной хроматографией или хроматографией с использованием центрифугирования

 


Orgy